多克隆抗體制備的常見問題解析

　　多克隆抗體制備能識別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白，例如當未測試物種中的抗原性質(zhì)未知時，有時會使用多克隆抗體。可識別多個結(jié)構(gòu)域，即使原始抗原的一些空間結(jié)構(gòu)或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化，仍可以識別抗原，因此有更大的適應性。

　　多克隆抗體制備的常見問題解析：

　　1、免疫動物該如何選擇？

　　選擇宿主動物時，一般要考慮兩個問題：

　?。?）免疫效果能否保證。特別是對于蛋白抗原的情況，為了保證免疫成功，就要求宿主動物與抗原來源物種之間有較遠的親緣關(guān)系，如果不太能確定親緣關(guān)系的遠近，建議把抗原的序列與被免疫的動物相應的蛋白的序列進行一個對比，優(yōu)先選擇同源性較低的物種進行免疫。

　?。?）抗血清產(chǎn)量的問題。根據(jù)實驗目的不同，抗血清的用量也有所不同。

　　如果后續(xù)是做Western Blot，那么只需要一點點血清就夠了，這個時候就可以選用小鼠這樣的小動物作為免疫動物，而如果想生產(chǎn)二抗作為商業(yè)使用，則可選用羊、驢、馬這樣的大型動物，大型動物還可以進行多次放血，以提高動物的利用率

　　2、如何選擇抗原？

　?。?）降解的蛋白抗原利于制備用于篩選細菌表達cDNA文庫或免疫沉淀。

　　（2）用于篩選真核細胞轉(zhuǎn)染系統(tǒng)表達的cDNA文庫或免疫沉淀，建議選用自然的蛋白抗原。

　　（3）如果制備抗*型抗體，所用抗原可以是可溶性Ig分子，或者是完整的細胞，也可以是基因工程表達產(chǎn)品*型決定簇、人工合成多肽及抗原化抗體等。

　　目前，以各類病原生物活體感染動物而獲得多克隆抗體（抗血清）作為檢測抗體，仍是常用方法。