大腸桿菌的蛋白表達(dá)試驗(yàn)要注意哪些？

蛋白表達(dá)技術(shù)已滲透到生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。越來(lái)越多的基因被發(fā)現(xiàn)，其中多數(shù)基因功能不明，利用蛋白表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段。常見的蛋白表達(dá)系統(tǒng)包括大腸桿菌/原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、酵母/真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)、植物蛋白表達(dá)系統(tǒng)。我們?nèi)绾蔚玫娇扇艿牡鞍祝咳绻Ｍ玫侥苄惺构δ艿牡鞍祝鞍讘?yīng)該以可溶形式表達(dá)。避免包涵體形成的方法很多，比如選用表達(dá)量不高的蛋白表達(dá)系統(tǒng)，選擇有助于可溶性表達(dá)的融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)等，使用基...

微生物內(nèi)進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)前需要考慮的8件事

在微生物內(nèi)進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)是生物科技中的核心技術(shù)。然而，每種蛋白質(zhì)都具有其*的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，比如二硫鍵（disulfidebonds）數(shù)量，是否存在疏水區(qū)域(hydrophobicregions)，是否存在跨膜區(qū)域(transmembranedomains)，是否具有糖基化(glycosylations)等翻譯后修飾過(guò)程等，所有的這些性質(zhì)都可能決定著蛋白質(zhì)表達(dá)過(guò)程的難易。在與目的蛋白質(zhì)來(lái)源相似的宿主內(nèi)表達(dá)蛋白質(zhì)要相對(duì)容易些。然而，大多時(shí)候，我們需要在與蛋白質(zhì)來(lái)源不同的宿主內(nèi)進(jìn)行蛋白...

多肽合成技術(shù)原理，多肽合成方法解讀

多肽是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物，是α－氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物。由兩個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理有n個(gè)氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做n肽。通常把三肽以上的叫多肽。多肽合成以固相合成為反應(yīng)原理，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序（序列，一般從C端-羧基端向N端-氨基端）不斷添加、反應(yīng)、合成，操作終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的。羧基端是游離的，并且在反應(yīng)之前...

抗體制備有關(guān)佐劑的配制講解

有了質(zhì)量好的抗原，還必須選擇適當(dāng)?shù)拿庖咄緩剑拍軐?duì)抗體制備質(zhì)量好（特異性強(qiáng)和效價(jià)高）的抗體。今天我們來(lái)看看佐劑的配制：由于不同個(gè)體對(duì)同一抗原的反應(yīng)性不同，而且不同抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)的能力也有強(qiáng)有弱，因此常常在注射抗原的同時(shí)，加入能增強(qiáng)抗原的抗原性物質(zhì)，以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。佐劑除了延長(zhǎng)抗原在體內(nèi)的存留時(shí)間，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，使參與免疫反應(yīng)的免疫活性細(xì)胞增多，促進(jìn)T細(xì)胞與B細(xì)胞的相互作用，從而增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的細(xì)胞免...

單克隆抗體的純化技術(shù)操作步驟

本文由艾柏森生物提供從培養(yǎng)液或腹腔積液獲得的單克隆抗體，不需要純化即可應(yīng)用于日常診斷或定性研究。如果用于免疫標(biāo)記測(cè)定，須分離和純化。可用半飽和、飽和硫酸銨進(jìn)行沉淀，進(jìn)行初步濃縮和純化；可用親和層析法進(jìn)一步純化。一、腹水型單抗的純化在單抗純化之前，一般均需對(duì)腹水進(jìn)行預(yù)處理，目的是為了進(jìn)一步除去細(xì)胞及其殘?jiān)⑿☆w粒物質(zhì)、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和過(guò)濾離心法，以前者處理效果為佳，而且操作簡(jiǎn)便。1、二氧化硅吸附法新鮮采集的腹水（或凍存的腹水），2000r/min15分...

常見的融合蛋白表達(dá)標(biāo)簽——總結(jié)

在重組蛋白中，常常將目的蛋白N端或C端與其他特定蛋白、多肽或寡肽標(biāo)簽進(jìn)行融合表達(dá)，形成既能保留天然蛋白的大部分結(jié)構(gòu)，又能實(shí)現(xiàn)增溶，防降解，促進(jìn)分泌，便于純化的功能；本文簡(jiǎn)要介紹生物藥研發(fā)生產(chǎn)過(guò)程中常見的融合蛋白標(biāo)簽；一、純化標(biāo)簽His標(biāo)簽His標(biāo)簽是當(dāng)前流行的標(biāo)簽蛋白。His標(biāo)簽是指六個(gè)組氨酸殘基組成的融合標(biāo)簽，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。當(dāng)某一個(gè)標(biāo)簽的使用，一是能構(gòu)成表位利于檢測(cè)；二是構(gòu)成*的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。其特點(diǎn)可總結(jié)為以下幾點(diǎn)：1.標(biāo)簽的分子量小，只...

技術(shù)服務(wù) 抗體測(cè)序服務(wù)

艾柏森生物科技有限公司作為值得信賴的抗體研發(fā)服務(wù)供應(yīng)商，擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，可為客戶提供的抗體測(cè)序服務(wù)。艾柏森生物打造的全新一代抗體測(cè)序平臺(tái)，基于蔦槍法與抗體數(shù)據(jù)庫(kù)相結(jié)合的技術(shù)“DatabaseAssistedShotgunSequencing”（DASS）技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)還適用于其他亞型和不同形式的抗體，如：IGM，熒光偶聯(lián)抗體，固定化抗體，不同物種的抗體等。等重氨基酸測(cè)序與其它基于MS測(cè)序方法不同的是，我們可以分辨大多數(shù)等重氨基酸復(fù)合物★W可與GE、AD、SV區(qū)分★R可從G...

技術(shù)服務(wù) X-射線晶體學(xué)

技術(shù)介紹：X-射線分辨單克隆抗體-抗原復(fù)合物是分析單克隆抗體識(shí)別表位的可靠方法，該方法基于對(duì)單克隆抗體-抗原共晶體衍射的X-射線束的強(qiáng)度和角度測(cè)量，再用生物信息學(xué)的方法確定原子坐標(biāo)，將復(fù)合體的三維結(jié)構(gòu)完整可視化。抗原表位分析對(duì)抗體人源化改造，抗體親和力提高，抗體穩(wěn)定性改造，發(fā)現(xiàn)新的功能表位，改變抗體特異性，設(shè)計(jì)新抗體，基于抗原－抗體相互作用的立體構(gòu)型設(shè)計(jì)新型功能分子改造抗體都很重要。應(yīng)用該方法首先需獲得純度較高的抗原、抗體，并使其相互作用形成共晶，但由于成本及技術(shù)要求較高，難...