做實(shí)驗(yàn)不會(huì)制備細(xì)胞爬片怎么行?

我們?cè)谧雒庖邿晒猓↖F），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測(cè)（TUNEL）時(shí)，免不了要制備細(xì)胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今天，就教大家如何制備好的細(xì)胞爬片。一.實(shí)驗(yàn)材料及試劑蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等；75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基（RPMI-1640*培養(yǎng)基）、胰酶等。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容爬片準(zhǔn)備：1、24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養(yǎng)皿中爬片。2.蓋玻片泡酸過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再置于無(wú)水酒清中浸...

安諾倫銷售Agrisera品牌產(chǎn)品——植物抗體ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，長(zhǎng)期以來(lái)，公司致力于植物/環(huán)境科學(xué)研究中所需蛋白抗體研發(fā)與銷售，以專注于研發(fā)高品質(zhì)稀有單克隆及多克隆抗體而在業(yè)界有較高知ming度。其抗體主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細(xì)胞生物學(xué)研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的抗體分兩大類：植物及藻類的抗體，以及細(xì)菌、真菌、昆蟲、魚等動(dòng)物類抗體。針對(duì)植物蛋白質(zhì)的保守氨基酸序列，Agirsera還du家開發(fā)了數(shù)十種通用抗體（globala...

快速抗體制備服務(wù)

抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細(xì)胞的激活與分化為漿細(xì)胞進(jìn)行的。在shou次免疫過(guò)程中，抗原首先經(jīng)多種兔疫相關(guān)淋巴或巨噬細(xì)胞吞噬充分暴露抗原,并將抗原呈遞給靜止B淋巴細(xì)胞，以使其活化，活化后的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識(shí)別決定簇，因此在經(jīng)過(guò)免疫相關(guān)細(xì)胞加工后，呈遞給B淋巴細(xì)胞的抗原決定簇也是多種多樣的，理論上，一個(gè)B淋巴細(xì)胞只接受-種抗原決定簇，產(chǎn)生-種對(duì)應(yīng)與之結(jié)合的抗體，多個(gè)B淋巴細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生多種識(shí)別抗原不同抗原決定簇(也就是表位)的抗體...

質(zhì)粒DNA提取實(shí)驗(yàn)

在我們的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)用到質(zhì)粒DNA，那么具體是怎么來(lái)的呢？今天講的是DNA的提取步驟。前提：細(xì)菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫?fù)u床搖過(guò)夜，180-200rpm）。一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：收集1.50ml離心管收集過(guò)夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時(shí)可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說(shuō)明細(xì)菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說(shuō)明細(xì)菌繁殖成功啦...

常見問(wèn)題之蛋白在真核細(xì)胞的表達(dá)量低？

實(shí)際上真核生物的蛋白也可以用真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，而且效果往往更好。用原核生物來(lái)表達(dá)主要還是因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，快速。如果希望表達(dá)和純化的蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)原核系統(tǒng)表達(dá)之后仍然有正確的折疊構(gòu)象，那么使用原核表達(dá)系統(tǒng)就很合適了。有的時(shí)候在不同的表達(dá)體系里面對(duì)蛋白的表達(dá)量是有影響的。當(dāng)構(gòu)建完成后攜帶有信號(hào)肽的時(shí)候，一些蛋白在真核表達(dá)體系中表達(dá)量極低。去除信號(hào)肽序列值后，直接表達(dá)成熟肽，表達(dá)水平明顯提高。所以說(shuō)構(gòu)建的真核表達(dá)載體高表達(dá)mRNA卻檢測(cè)不到目的蛋白是*有可能的。

常見問(wèn)題之影響蛋白表達(dá)因素有哪些？

1.蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白來(lái)源/物種、是否為毒性蛋白，蛋白翻譯后修飾程度、蛋白自身結(jié)構(gòu)的復(fù)雜程度2.宿主的選擇：宿主本身的特性、蛋白表達(dá)需求等都影響著蛋白表達(dá)3.蛋白需求量：蛋白應(yīng)用范圍對(duì)應(yīng)的需求量不同，所以要根據(jù)需求量確定表達(dá)系統(tǒng)4.質(zhì)粒載體的選擇：載體是攜帶外源基因的工具，要根據(jù)系統(tǒng)選擇合適的載體才能使蛋白更好的表達(dá)5.融合標(biāo)簽的選擇：蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋...

常見問(wèn)題之HIS標(biāo)簽蛋白沒(méi)有被洗脫下來(lái)

蛋白掛柱后洗脫不下來(lái)主要是因?yàn)榈鞍缀椭咏Y(jié)合能力太強(qiáng)或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問(wèn)題。1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當(dāng)降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。2、蛋白在柱子中沉淀：適當(dāng)降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑...

慢病毒構(gòu)建原理

慢病毒載體（Lentivirus）是一類改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒載體，是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，基因組是RNA，其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。可利用逆轉(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性。◆慢病毒基因組進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞漿中反轉(zhuǎn)錄為DNA，形成DNA整合前復(fù)合體，進(jìn)入細(xì)胞核后，DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA，回到細(xì)胞漿中，表達(dá)目的蛋白；或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)或小...