多克隆抗體制備實(shí)驗(yàn)方法

　　多克隆抗體制備主要是哺乳動(dòng)物和禽類，如兔、綿羊、山羊、鼠、馬等。動(dòng)物選擇根據(jù)抗體的用途和量來決定，也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如需要大量的抗體，則用大動(dòng)物；如要獲得直接標(biāo)記診斷的抗體，則用本種動(dòng)物；如要獲得間接標(biāo)記診斷的抗體，則用異源動(dòng)物；如抗原量少，且難獲得，則用純系小鼠；一般實(shí)驗(yàn)室用抗體，多用兔或鼠。對于用于診斷的抗體，建議用動(dòng)物通常選年輕、健康的雄性動(dòng)物，懷孕的雌性動(dòng)物一般不用于制備抗體。
 

　　多克隆抗體制備實(shí)驗(yàn)方法：
 

　　⒈ 抗原的制備
 

　　抗原制備的主要目的在于在免疫動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生強(qiáng)、適當(dāng)?shù)目贵w。由于純化的抗原適合產(chǎn)生抗體，因此在注射前通常采用一些經(jīng)典的方法，比如柱層析、分級(jí)萃取、亞細(xì)胞分離等進(jìn)行抗原的分離和純化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝膠中的抽提可作為純化的步驟。
 

　　⒉ 預(yù)放血
 

　　輕輕的將兔子放在特制兔盒中，處于放松狀態(tài)的兔子采血會(huì)較容易。按壓兔子耳根部直至血管突出,然后將針頭插入耳部血管的中上部，觀察到進(jìn)針后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。結(jié)束收集后，退出針頭并按壓傷處以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘以防止激活補(bǔ)體系統(tǒng)，再將試管在4°C 放置過夜使血液凝固。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落，將血液轉(zhuǎn)移至塑料離心管中，4°C，10,000g離心10分鐘，收集上清液在4°C保存。