技術(shù)服務(wù)|哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢

1. 能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性；

2. 表達(dá)水平高；

3. 高效啟動(dòng)子控制蛋白表達(dá)

4. 適合大規(guī)模蛋白表達(dá)。

艾伯森生物哺乳表達(dá)系統(tǒng)

艾伯森生物提供表達(dá)載體構(gòu)建、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、表達(dá)測試及大規(guī)模動(dòng)物細(xì)胞發(fā)酵和蛋白純化等一站式蛋白技術(shù)服務(wù)。

表達(dá)載體：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常規(guī)載體以及我司分子技術(shù)人員自行合成與后期改造的zhaunli性載體。

艾伯森生物哺乳表達(dá)系統(tǒng)服務(wù)內(nèi)容

1. 載體構(gòu)建及改進(jìn)

 1) 可將cDNA克隆至客戶或艾伯森生物提供的哺乳細(xì)胞的表達(dá)載體中；

 2) 可在表達(dá)載體中添加分泌信號肽和純化標(biāo)簽，促進(jìn)蛋白分泌表達(dá)及滿足一步親和純化的需求；

 3) 能生產(chǎn)并鑒定高效穩(wěn)定細(xì)胞系，適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

2. 穩(wěn)定基因表達(dá)符合長期生存需求。整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作流程提供長期穩(wěn)定及規(guī)?？烧{(diào)的蛋白生產(chǎn)

3. 瞬時(shí)表達(dá)（TGE）

 1) 與穩(wěn)定基因表達(dá)相比，TGE主要適用于短期內(nèi)制備重組蛋白，一般在10天內(nèi)即可快速轉(zhuǎn)染，無需質(zhì)粒DNA的遺傳性選擇

 2) 艾柏森生物的瞬時(shí)表達(dá)使用懸浮細(xì)胞，能夠完成體積到100L的蛋白表達(dá)。

4. 工藝過程開發(fā)及擴(kuò)大規(guī)模。艾柏森生物能夠優(yōu)化表達(dá)過程以及表達(dá)產(chǎn)物，檢測細(xì)胞表達(dá)量，摸索發(fā)酵罐發(fā)酵條件，適合大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)。

5. 純化。艾伯森生物擁有完整的蛋白純化系統(tǒng)，親和純化，凝膠過濾，離子交換及疏水層析等純化方法，能夠完成帶標(biāo)簽與不帶標(biāo)簽蛋白的純化，以及純化工藝的摸索。

服務(wù)流程

經(jīng)典案例

某生物細(xì)胞器基質(zhì)蛋白，全長334aa，大小37.03kDa，自帶Fc標(biāo)簽蛋白，采用293F細(xì)胞表達(dá)。我們在對其編碼基因進(jìn)行全密碼子優(yōu)化后，把它構(gòu)建到pTT3載體上，測序驗(yàn)證無誤后，進(jìn)行了30ml體積試表達(dá)，如Figure1：

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.?. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的最大回收率，我們先后對Flowthrough進(jìn)行了兩次Protein G純化（Figure2~Figure3），可以看到在第二次純化后，F(xiàn)T中尚殘留的目的蛋白。

Figure2. Target protein purification profile.

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

為此我們提高了鹽濃度至300mMNaCl，這次洗脫后，F(xiàn)T中剩余的蛋白量顯著降低，如Figure4.

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表達(dá)摸索清楚成熟的實(shí)驗(yàn)條件后，我們進(jìn)入大體積制備，2L發(fā)酵。

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.